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  • 产品名称: 通用RNA提取试剂盒(离心柱型) 50次
  • 产品货号: RNA-01
  • English Name:
  • 产品价格/规格: 650元/瓶
  • 产地:
  • 更新时间:

通用RNA提取试剂盒(离心柱型)
编号:R1051

 

通用RNA提取试剂盒(离心柱型)

 

 

货号

规格

价格

R1051

50次

650

 

产品组分

 

组分

R1051(50 次)

溶液 RL

60 ml

溶液 RPI

18 ml

溶液 RW

12 ml

DEPC处理水

15 ml

RNase-free 纯化柱

50 个

RNase-free 离心管

50 个

RNase-free 收集管

50 个

说明书

1 份

 

需要自备的溶液

● 氯仿

● 无水乙醇

 

产品说明

通用RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品,提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度,同时通过可在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA,而各种蛋白质和其他

杂质均可被去除掉对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力,得到的RNA 纯度更好,质量更高。该试剂盒可从各种细胞或组织中快速提取总RNA,每个吸附柱每次可处理

50–100 mg 组织或5×106 细胞,可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应,提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛

选、体外翻译、RNase ?;し治龊头肿涌寺?。

 

保存条件

溶液 RL应在2-8℃避光保存,其他溶液和纯化柱室温保存。

 

注意事项---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。

● 使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下(与组织pH值等相关),如果有DNA污染而又必须去除,则可以用RNase-free的DNase处理样品。

● 请严格遵照操作步骤操作。

● 不同起始材料试剂用量及预期RNA产率。

 

操作步骤---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

第一次使用前应在溶液 RPI、溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

1. 样品处理

a. 组织:将组织在液氮中磨碎。每 50–100 mg 组织加1 ml 溶液 RL,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ 体积的十分之一。

b. 单层培养细胞:直接在培养板中加入裂解液RZ 裂解细胞,每10 cm2 面积加1 ml溶液 RL。用取样器抽打几次。

注意:溶液 RL 的加入量根据培养瓶面积决定,不是由细胞数决定。如果加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。

c. 细胞悬液:离心取细胞,弃上清。每5–10×106 动物细胞和植物细胞加入1 ml 溶液 RL。加溶液 RL 前不要洗涤细胞,以免降解mRNA。

2. 将匀浆样品在15–30℃放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤: 412,000 rpm (~13,400×g) 离心5分钟,取上清,转入一个新的无RNase 的离心管中。

注意:如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等,可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA,RNA存在于上清

溶液中。

4. 加入200 μl 氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15 s,室温放置3 min。

5. 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心10 min,样品会分成三层:黄色的有机相,中间层和无色的水相,RNA 主要在水相中,水相的体积约为所用溶液 RL试剂的60%。把水

相转移到新管中,进行下一步操作。第一次使用前应在溶液 RPI、溶液 RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

6. 缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,若一次不能将全部溶液和

混合物加入纯化柱,请分两次转入纯化柱中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃掉收集管中的废液。

7. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RPI(使用前请先检查是否已加入乙醇),4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液。

8. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RW(使用前请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s,弃废液。

9. 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW,室温静置2 分钟,4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s,去除残余液体。

10. 将纯化柱入2ml 收集管中,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min,去除残余液体。

注意:此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除,离心后将纯化柱在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续

RT等实验操作。

11. 将纯化柱转入一个新的离心管中,加30–100 μl RNase-free ddH2O,室温放置2 min,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

洗脱缓冲液体积不应少于30 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。

注意:如果想提高RNA得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。

 
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